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專(zhuān)家介紹LC液相色譜儀采用哪些技術(shù)指導(dǎo)

更新時(shí)間:2018-07-05      點(diǎn)擊次數(shù):3010
   LC液相色譜儀適用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定易分解的、分子量大、極性不同的有機(jī)化合物;生物活性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物;合成和天然的高分子化合物等。在自然界中,80%的有機(jī)物都可以用液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分析和檢測(cè)。LC液相色譜儀系統(tǒng)主要應(yīng)用于食品安全、藥物分析、環(huán)境保護(hù)以及衛(wèi)生防疫、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)、畜牧業(yè)、制造業(yè)、石油化工、質(zhì)量監(jiān)督、教學(xué)研究、水利系統(tǒng)等領(lǐng)域。
  LC液相色譜儀系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,LC液相色譜儀被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過(guò)檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
  使用LC液相色譜儀時(shí),液體待檢測(cè)物被注入色譜柱,通過(guò)壓力在固定相中移動(dòng),由于被測(cè)物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同,不同的物質(zhì)順序離開(kāi)色譜柱,通過(guò)檢測(cè)器得到不同的峰信號(hào),zui后通過(guò)分析比對(duì)這些信號(hào)來(lái)判斷待測(cè)物所含有的物質(zhì)。LC液相色譜儀作為一種重要的分析方法,廣泛地應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒(méi)有本質(zhì)的差別,它的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測(cè)器和微粒固定相,適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物。
  LC液相色譜儀的構(gòu)造
  液相色譜系統(tǒng)主要由流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄儀組成,其整體組成類(lèi)似于氣相色譜,但是針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。液相色譜的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn),進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利、切換嚴(yán)密。同時(shí),由于液體流動(dòng)相黏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體,為了減低柱壓,液相色譜的色譜柱一般比較粗,長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。
  液相色譜應(yīng)用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。
  LC液相色譜儀它包括空柱和填料??罩莾?nèi)壁拋光的不銹鋼管,內(nèi)徑為4~5mm,長(zhǎng)100~250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相。
  等基線(xiàn)平直后可用苯、萘、菲的混合試液,用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)為流動(dòng)相測(cè)定柱效及分離度塔板數(shù)在2~3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者,柱效好。為防止柱污染,常用1個(gè)50mm長(zhǎng),4~5mm內(nèi)徑,裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護(hù)柱(預(yù)柱)接在主柱之前,以延長(zhǎng)色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng),以洗去鹽類(lèi)、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。
  流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中,經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,zui后自檢測(cè)器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法,即自洗脫開(kāi)始到結(jié)束,溶劑的配比恒定。
  另一類(lèi)為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離,而整個(gè)色譜過(guò)程縮短。必須注意,梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測(cè)的反相液相色譜法中。
  檢測(cè)器適用于血藥濃度的檢測(cè)器有紫外線(xiàn)吸收,熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測(cè)器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物,大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收,故能較普遍采用,檢測(cè)限有0.1μg左右。紫外檢測(cè)器有固定波長(zhǎng)型、可變波長(zhǎng)型及掃描器,既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測(cè),又能提高測(cè)定靈敏度,重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測(cè)器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。
  電化學(xué)檢測(cè)器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測(cè)兒茶酚胺類(lèi)及有酚類(lèi)基團(tuán)的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池,在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流,放大后檢測(cè),檢測(cè)限pg級(jí)。
  數(shù)據(jù)處理現(xiàn)代液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),除記錄譜外,還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間,能自動(dòng)積分求算峰面積,并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計(jì)算,報(bào)告分析結(jié)果。
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